Как получают бактериофаги, Охотники на микробов: что такое бактериофаги, как они работают и что ими лечат
Примечание: в соответствии с пунктом 9 Порядка разработки общих фармакопейных статей и фармакопейных статей и включения их в государственную фармакопею, а также размещения на официальном сайте в сети «Интернет» данных о государственной фармакопее, утверждённого приказом Минздравсоцразвития России от Анатоксин дифтерийный адсорбированный с уменьшенным содержанием антигена АД-М-анатоксин 3. Аронии черноплодной свежие плоды 2.
Бактериофаги способны разрушать патогенные микроорганизмы, которые относятся к этой группе. В Великобритании и Бангладаше успешно провели эксперименты по лечению бактериофагами хронического отита, вызванного нечувствительной к антибиотикам синегнойной палочкой Pseudomonas aeruginosa.
Медицинские центры Франции, Бельгии и Швейцарии проводят клинические испытания коктейля фагов для предотвращения инфекций при ожогах. Об испытаниях собственных оригинальных коктейлей фагов для лечения широкого спектра заболеваний сообщают и американские компании. Правда, ни одно из этих масштабных клинических испытаний пока не доведено до конца. Добились успехов в лечении бактериофагами и даже вышли на уровень промышленного производства пять стран: Россия, Грузия, Польша, Украина и Узбекистан.
В России изучают и применяют бактериофаги на практике уже более лет. Первый этап — это выделение штаммов бактерий и бактериофагов из объектов внешней среды или от больного. На втором этапе происходит приготовление питательных сред, посевной бактериальной культуры и посевных маточных бактериофагов. Для получения маточных бактериофагов питательные среды засеивают штаммами бактерий. После этого туда же добавляют в небольшом количестве вирулентные бактериофаги — такие, которые способны разрушать клетки бактерий.
Следующий этап — приготовление фаголизатов, очистка и сведение. Питательную среду с бактериальными клетками и маточными бактериофагами помещают в реакторы, где происходит культивирование. Объем реакторов — от до л. На следующем этапе происходит ультрафильтрация — очищение полученной суспензии бактериофага от остатков бактериальных клеток и среды выращивания.
Полученный промежуточный продукт называют фаголизатом. Использование метода ультрафильтрации при производстве бактериофагов в АО «НПО «Микроген» обеспечило безопасность всех выпускаемых препаратов. А реакторная технология культивирования позволяет получить большие объемы фаговых препаратов, используя по минимуму ручной труд. После ультрафильтрации фаголизат концентрируют. Далее препарат стерилизуют — это является залогом отсутствия в нем посторонних микроорганизмов.
На завершающем этапе контролируют активность и эффективность полученного препарата. Полученный препарат — прозрачную жидкость насыщенно- или светло-желтого цвета — разливают во флаконы. Их плотно закрывают в атмосфере инертного газа, благодаря чему внутрь не могут проникнуть посторонние вещества, способные нарушить стерильность или повлиять на свойства препарата.
После чего проверяют, насколько прочно закупорены все флаконы. Сухую массу бактериофага контролируют в тестах на специфическую активность и микробиологическую чистоту;.
В качестве вспомогательных веществ используют пектин, кальция глюконат, глюкозу, тальк, кальция стеарат. Таблетки проверяют на ломкость, отсутствие дефектов сколов, расслоений , определяют среднюю массу таблеток;. К специфическим методам исследования, используемым для характеристики лечебно-профилактических бактериофагов, относятся методы Аппельмана и Грациа. Специфическую активность бактериофагов и стабильность лизиса по методу Аппельмана определяют с использованием гомологичных тест-штаммов бактерий контрольных штаммов.
Показатели специфической активности указывают в фармакопейной статье. Контрольные штаммы отбирают из коллекции производственных штаммов бактерий. Состав питательного бульона указывают в фармакопейной статье на определенный фаговый препарат. Испытания проводят с соблюдением правил асептики. В пробирках, содержащих по 4,5 мл питательного бульона МПБ, бульона Хоттингера , готовят ряд последовательных десятикратных разведений бактериофага от до в зависимости от показателей специфической активности, заложенных в фармакопейную статью на конкретный фаговый препарат с обязательной сменой пипеток при каждом разведении.
Для приготовления первого разведения добавляют 0,5 мл образца препарата к 4,5 мл бульона. В качестве контроля используют пробирку с 4,5 мл бульона без фага. После этого во все пробирки с полученными разведениями бактериофага пипеткой вносят по 0,03 мл взвеси суточной агаровой культуры бактерий, содержащей микробных клеток в 1 мл по стандарту мутности 10 МЕ. Возможно изменение длительности инкубации в зависимости от видовых особенностей роста бактериальной мишени фагового препарата, о чем указывают в фармакопейной статье.
Результат определяют по отсутствию видимого роста бактерий в присутствии бактериофага. Активность бактериофага обозначают отрицательной степенью десяти, где степень указывает последнее разведение бактериофага, в котором рост контрольного штамма визуально не наблюдается.
Для определения стабильности лизиса срок инкубации продлевают до 2 сут. Для титрации используют посевные штаммы бактерий. Готовят десятикратные последовательные разведения маточного фага в МПБ по методу Аппельмана от до или выше, в зависимости от специфической направленности бактериофага. Затем добавляют мл часовой бульонной культуры посевного штамма, подготовленного из суточной культуры, выращенной на плотной питательной среде, в соответствии с требованиями к производственным бактериальным штаммам.
Для определения концентрации фаговых частиц в маточном фаге подсчитывают количество негативных колоний прозрачные пятна на матовом фоне глубинного роста бактерий в каждой чашке, умножают на коэффициент разведения фага в пробирке с соответствующим разведением.
Затем вычисляют среднее значение 3 определений. Данная методика используется при отборе перспективных фаговых рас в коллекцию маточных бактериофагов. От вида бактериофагов зависит порядок применяемых в опыте разведений.
Показатель pH фаголизата должен составлять от 6,6 до 7,8. Испытание проводят потенциометрическим методом в соответствии с ОФС " Ионометрия ".
Очищенный и концентрированный фильтрат фаголизатов должен быть стерильным. Испытание проводят в соответствии с ОФС " Стерильность ". Аномальная токсичность. Введение мышам очищенного фильтрата фаголизатов не должно вызывать гибель животных.
Определение проводят в соответствии с ОФС " Аномальная токсичность ". Тест-доза препарата бактериофага в объеме 1 мл вводится животным подкожно. Проводят необходимые испытания, предусмотренные для лечебно-профилактических бактериофагов в соответствующей лекарственной форме. Приводится описание физических свойств соответствующей лекарственной формы лекарственного средства. Испытание проводят визуально. Подлинность препарата подтверждается его специфической активностью.
Извлекаемый объем для растворов - не должен быть менее номинального. Определение проводят в соответствии с ОФС " Извлекаемый объем ". Средняя масса и отклонения от средней массы для таблеток. Приводятся требования к средней массе и максимально допустимые отклонения от средней массы в соответствии с ОФС " Однородность массы дозированных лекарственных форм ".
Время распадаемости для таблеток не должно превышать 30 мин, если в фармакопейной статье на определенный фаговый препарат нет других указаний. Испытание проводят в соответствии с ОФС " Распадаемость таблеток и капсул ".
Бактериофаги, выпускаемые в виде кишечнорастворимых таблеток, не должны распадаться в течение 1 ч в 0,1 М растворе хлористоводородной кислоты и после промывания водой должны распадаться в растворе натрия гидрокарбоната рН от 7,5 до 8,0 в течение 30 мин.
Стерильность для растворов. Испытание стерильности проводят методом прямого посева или мембранной фильтрации в соответствии с ОФС " Стерильность ".
Микробиологическая чистота для таблеток должна соответствовать категории 5. Испытание проводят в соответствии с требованиями ОФС " Микробиологическая чистота ". Введение мышам подкожно 1 мл препарата бактериофага не должно вызывать гибель животных. Пробоподготовку препаратов указывают в фармакопейной статье на препарат.
Специфическая активность. Активность бактериофага обозначают отрицательной степенью десяти, где степень указывает последнее разведение бактериофага, в котором рост контрольных штаммов бактерий визуально не наблюдается. Нормативные требования, в том числе количество используемых контрольных штаммов не менее 10 штаммов для монопрепаратов , указывают в фармакопейной статье на препарат.
Определение проводят титрованием в жидкой питательной среде по методу Аппельмана. Методику и подготовку проб указывают в фармакопейной статье на конкретный фаговый препарат. Упаковка и маркировка.
В соответствии с ОФС " Иммунобиологические лекарственные препараты ". В маркировке лекарственной формы "раствор" должна быть предусмотрена предупредительная надпись "При помутнении не применять".
Государственная фармакопея Российской Федерации XV издания 1. Общие фармакопейные статьи 1. Общие положения 1. Фармацевтическая разработка 1. Упаковка, материалы упаковки и методы их анализа 1. Методы анализа лекарственных средств 1. Методы физического и физико-химического анализа 1. Методы спектрального анализа 1. Хроматографические методы анализа 1. Методы химического анализа 1. Испытание на предельное содержание примесей 1.
Методы количественного определения 1. Биологические испытания 1. Реактивы 1. Лекарственные формы и методы их анализа 1. Лекарственные формы 1.
Фармацевтико-технологические испытания лекарственных форм 1. Лекарственное растительное сырьё, лекарственные средства растительного происхождения и методы их анализа 1. Морфологические группы лекарственного растительного сырья 1. Масла для производства и изготовления лекарственных препаратов 1. Методы анализа лекарственного растительного сырья, лекарственных средств растительного происхождения 1. Гомеопатические лекарственные средства 1.
Лекарственное сырьё для гомеопатических лекарственных препаратов 1. Лекарственные формы гомеопатических лекарственных препаратов 1. Биологические лекарственные средства 1. Иммунобиологические лекарственные препараты и методы их анализа 1. Иммунобиологические лекарственные препараты 1.
Методы анализа иммунобиологических лекарственных препаратов 1. Лекарственные препараты из крови и плазмы крови человека и методы их анализа 1. Лекарственные препараты из крови и плазмы крови человека 1. Методы анализа лекарственных препаратов из крови и плазмы крови человека и животных 1. Биотехнологические лекарственные препараты и методы их анализа 1. Биотехнологические лекарственные препараты 1. Методы анализа биотехнологических лекарственных препаратов 1. Генотерапевтические лекарственные препараты и методы их анализа 1.
Лекарственные препараты аптечного изготовления 1. Радиофармацевтические лекарственные препараты 2. Фармацевтические субстанции 2. Фармацевтические субстанции синтетического происхождения 2. Фармацевтические субстанции минерального происхождения 2.
Фармацевтические субстанции животного происхождения 2. Фармацевтические субстанции растительного происхождения 2. Лекарственное растительное сырьё 2. Гомеопатические фармацевтические субстанции 2. Лекарственные препараты 3. Лекарственные препараты синтетического происхождения 3. Лекарственные препараты минерального происхождения 3. Лекарственные препараты на основе субстанций растительного происхождения 3.
Лекарственные препараты животного происхождения 3. Радиофармацевтические лекарственные препараты 3. Лекарственные препараты аптечного изготовления 3.
Вводная часть 1. Радиофармацевтические лекарственные препараты 1. Методы биологического анализа 1. Лекарственные формы лекарственных средств и методы их анализа 1. Лекарственные формы лекарственных средств 1. Фармацевтико-технологические испытания на лекарственные формы 1.
Лекарственное растительное сырье и методы его анализа 1. Лекарственные средства растительного происхождения 1. Методы анализа лекарственного растительного сырья 1. Лекарственное сырье для гомеопатических лекарственных препаратов 1. Лекарственные формы гомеопатических препаратов 1.
Биологические лекарственные препараты и методы их анализа 1. Иммунобиологические и биотехнологические лекарственные препараты 1. Методы анализа биологических лекарственных препаратов 1. Генотерапевтические лекарственные препараты и методы их анализа 2. Лекарственное растительное сырье 2. Гомеопатические фармацевтические субстанции 3. Лекарственные препараты на основе субстанций синтетического происхождения 3. Лекарственные препараты на основе фармацевтических субстанций минерального происхождения 3.
Биологические лекарственные препараты 3. Иммунобиологические и биотехнологические лекарственные препараты 3. Лекарственные препараты, полученные из крови и плазмы крови человека 3. Общие статьи 1. Правила пользования фармакопейными статьями 1. Хранение лекарственных средств 1. Хранение лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов 1. Валидация аналитических методик 1. Статистическая обработка результатов химического эксперимента 1.
Статистическая обработка результатов определении специфической фармакологической активности лекарственных средств биологическими методами вып. Стерилизация 1. Полиморфизм 1. Кристалличность 1. Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов 1.
Единицы международной системы СИ , используемые в фармакопее 1. Оборудование 1. Отбор проб 1. Отбор проб лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов 1. Фармацевтические субстанции 1. Остаточные органические растворители 1. Сроки годности лекарственных средств 1. Радиофармацевтические лекарственные средства 1. Методы анализа 1. Спектроскопические методы анализа 1. Потеря в массе при высушивании 1. Температура плавления 1.
Температура затвердевания 1. Температурные пределы перегонки и точка кипения 1. Плотность 1. Вязкость 1. Определение спирта этилового в лекарственных средствах 1. Рефрактометрия 1. Поляриметрия 1. Электрометрические 1. Электропроводность 1.
Электрофорез 1. Капиллярный электрофорез 1. Электрофорез в полиакриламидном геле 1. Автоматический элементный анализ 1. Осмолярность 1. Ионометрия 1. Растворимость 1. Степень окраски жидкостей 1. Прозрачность и степень мутности жидкостей 1. Определение распределения частиц по размеру методом лазерной дифракции света 1.
Оптическая микроскопия 1. Общие реакции на подлинность 1. Испытание на чистоту и допустимые пределы примесей 1. Определение фтора 1. Метод сжигания в колбе с кислородом 1. Определение азота в органических соединениях методом Къельдаля 1. Определение белка 1. Нитритометрия 1. Кислотно-основное титрование в неводных средах 1.
Комплексонометрическое титрование 1. Определение кислотонейтрализующей способности 1. Методы количественного определения витаминов 1. Определение цинка в инсулине 1.
Определение сахаров спектрофотометрическим методом 1. Определение воды 1. Спектрофотометрическое определение фосфора 1. Определение адсорбционной активности энтеросорбентов 1. Определение аминного азота методами формольного и йодометрического титрования 1.
Анизидиновое число 1. Кислотное число 1. Йодное число 1. Гидроксильное число 1. Перекисное число 1. Число омыления 1. Эфирное число 1. Биологические испытания инсулина 1. Определение антимикробной активности антибиотиков методом диффузии в агар 1.
Определение эффективности антимикробных консервантов 1. Определение содержания витаминов в многокомпонентных лекарственных препаратах микробиологическим методом 1.
Определение активности ферментных лекарственных препаратов 1. Микробиологическая чистота 1. Стерильность 1. Аномальная токсичность 1. Пирогенность 1. Бактериальные эндотоксины 1. Испытание на гистамин 1. Испытание на депрессорные вещества 1. Биологические методы оценки активности лекарственного растительного сырья и лекарственных препаратов, содержащих сердечные гликозиды 1.
Индикаторы 1. Титрованные растворы 1. Буферные растворы 1. Порошки 1. Растворы 1. Сиропы 1. Суппозитории 1.
Суспензии 1. Таблетки 1. Трансдермальные пластыри 1. Эмульсии 1. Настои и отвары 1. Настойки 1. Аэрозоли и спреи 1. Сборы 1. Экстракты 1. Гранулы резано-прессованные 1. Глазные лекарственные формы 1.
Гранулы 1. Капсулы 1. Лекарственные формы для ингаляций 1. Лекарственные формы для парентерального применения 1. Мази 1. Пластыри медицинские 1. Аэродинамическое распределение мелкодисперсных частиц 1. Определение времени полной деформации суппозиториев на липофильной основе 1. Прочность таблеток на раздавливание 1. Распадаемость суппозиториев и вагинальных таблеток 1. Распадаемость таблеток и капсул 1.
Растворение для твердых дозированных лекарственных форм 1. Растворение для суппозиториев на липофильной основе 1. Степень сыпучести порошков 1. Растворение для трансдермальных пластырей 1. Извлекаемый объём 1. Извлекаемый объём лекарственных форм для парентерального применения 1. Истираемость таблеток 1. Видимые механические включения в лекарственных формах для парентерального применения и глазных лекарственных формах 1.
Невидимые механические включения в лекарственных формах для парентерального применения 1. Масса объем содержимого упаковки 1. Однородность дозирования 1. Однородность массы дозированных лекарственных форм 1. Лекарственное растительное сырье, фармацевтические субстанции растительного происхождения, лекарственные растительные препараты и методы их анализа 1. Лекарственное растительное сырье.
Фармацевтические субстанции растительного происхождения 1. Травы 1. Листья 1. Цветки 1. Кора 1. Корни, корневища, луковицы, клубни, клубнелуковицы 1.
Плоды 1. Семена 1. Почки 1. Эфирные масла 1. Масла жирные растительные 1. Методы анализа лекарственного растительного сырья, фармацевтических субстанций растительного происхождения и лекарственных растительных препаратов 1. Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах 1. Определение содержания эфирного масла в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах 1.
Определение содержания остаточных пестицидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах 1. Определение коэффициента водопоглощения и расходного коэффициента лекарственного растительного сырья 1. Определение степени зараженности лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов вредителями запасов 1. Техника микроскопического и микрохимического исследования лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов 1.
Определение подлинности, измельченности и содержания примесей в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах 1. Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте 1. Определение содержания экстрактивных веществ в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах 1. Определение влажности лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов 1.
Определение содержания дубильных веществ в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах 1.
Определение содержания тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах 1.
Группы иммунобиологических лекарственных препаратов и методы их анализа 1. Группы иммунобиологических лекарственных препаратов 1. Аллергены ОФС. Бактериофаги 1. Бифидосодержащие пробиотики 1. Вакцины и анатоксины 1. Колисодержащие пробиотики 1. Лактосодержащие пробиотики 1. Лекарственные средства, получаемые методами рекомбинантных ДНК 1.
Пробиотики 1. Споровые пробиотики 1. Безопасность пробиотиков в тестах in vivo 1. Оценка специфической безопасности производственных штаммов и посевных вирусов кори, паротита и краснухи 1. Требования к клеточным культурам - субстратам производства иммунобиологических лекарственных препаратов 1. Производственные пробиотические штаммы и штаммы для контроля пробиотиков 1. Полимеразная цепная реакция 1. Метод спектроскопии ЯМР для определения подлинности полисахаридных вакцин 1.
Общие принципы анализа цитокинов и интерферонов методом ВЭЖХ 1. Определение ионов алюминия в сорбированных иммунобиологических лекарственных препаратах 1. Спектрофотометрическое определение фосфора в иммунобиологических лекарственных препаратах 1.
Определение нуклеиновых кислот по методу Спирина в иммунобиологических лекарственных препаратах 1. Определение О-ацетильных групп в полисахаридных вакцинах 1. Биологические методы испытания препаратов интерферона с использованием культур клеток 1.
Определение бычьего сывороточного альбумина методом ракетного иммуноэлектрофореза в иммунобиологических лекарственных препаратах 1. Изоэлектрическое фокусирование 1. Определение подлинности и чистоты иммунобиологических 1.
Определение белка колориметрическим методом метод Лоури в иммунобиологических лекарственных препаратах 1. Количественное определение формальдегида в иммунобиологических лекарственных препаратах 1. Количественное определение тиомерсала в иммунобиологических лекарственных препаратах 1. Определение белкового азота с реактивом Несслера с предварительным осаждением белкового материала в иммунобиологических лекарственных препаратах 1.
